Análisis de la expresión génica relativa mediante PCR en tiempo real
La PCR en tiempo real (qPCR) es una metodología que permite la cuantificación de ADN y ARN con una alta sensibilidad, siendo el método más elegido en la actualidad. Los servicios que ofrecemos incluyen:
1) Extracción de ácidos nucleicos mediante el método del TRIzol.
2) Cuantificación mediante espectrofotometría (Nanodrop) y determinación de la calidad mediante electroforesis en geles de agarosa.
3) Síntesis del ADNc (en el caso de análisis de transcriptos).
4) Asesoramiento en el diseño o diseño de primers y validación del ensayo (eficiencia, especificidad y rango dinámico).
5) Preparación de la reacción de PCR en tiempo real, programación y corrida para la determinación de la expresión génica mediante el método del SYBR Green utilizando el equipo StepOne Plus de 96 pocillos (Applied Biosystem).
6) Análisis de los resultados mediante expresión relativa del gen de interés en las muestras control y tratadas según los métodos del ΔΔCt (Livak y Schmittgen, 2001) o N0 (Ruijter y col., 2009).
Aplicación
Este servicio permite la cuantificación relativa de la expresión de genes entre muestras de una condición/sometidas a un tratamiento comparado con muestras control. La determinación de la expresión génica es importante tanto para la ciencia básica como aplicada, por ejemplo, en áreas de la industria como de la salud.
Preguntas frecuentes
¿Es necesario contratar todos los servicios juntos?
No, los servicios pueden ser adquiridos individualmente.
¿Puedo evaluar la expresión génica utilizando primers que tenga diseñados y disponibles?
Sí, el usuario puede entregar una alícuota de primers propios al servicio.
¿Se pueden extraer ácidos nucleicos de cualquier muestra mediante el servicio ofrecido?
No, contamos con nivel de bioseguridad 1, por lo que no podemos extraer ácidos nucleicos de muestras patogénicas o humanas. Sin embargo, sí podemos analizar la expresión de genes de estas muestras si el usuario provee al servicio del ADNc de las mismas.
Responsable Técnica
Dra. María Belén Fernández
2235826835
mbfernan@mdp.edu.ar